研究显示鹤蟾片含药血清处理后,LAC细胞呈现一系列凋亡特征改变。揭示鹤蟾片可抑制LAC肿瘤细胞增殖,对细胞凋亡具有一定的促进作用。抑制肿瘤细胞增殖,诱导其分化,最终使其发生凋亡,是鹤蟾片抗肿瘤作用的主要机制。
研究中经鹤蟾片含药血清作用后的LAC细胞,倒置相差显微镜下见细胞体积缩小,核裂解,细胞贴壁能力下降;经AO染色,荧光显微镜下细胞核呈致密浓染的块状或颗粒状橘黄色荧光,较之对照组有明显的差异。流式细胞仪可定量分析细胞的凋亡情况,研究表明细胞DNA断裂是渐进的过程,首先断裂成大片段,然后逐渐生成小片段,初期形成的大片段不易从细胞内溢出。
细胞周期分析只显示AP峰处于G0-G1期发生凋亡的细胞,TUNEL法更全面地反映了整个细胞群的凋亡发生情况,鹤蟾片检测阳性标记率显著高于细胞周期分析AP峰,这是由于处于S期、G2-M期的细胞,其DNA含量高于G0-G1期细胞,即使DNA溢出,也不一定进入亚G2期,再则早期凋亡细胞尽管DNA断裂点增加,TUNEL分析阳性,但其DNA含量并未显著低于正常两倍体细胞。
细胞凋亡中,染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3’-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3’一末端,从而可进行凋亡细胞的TUNEL法检测。经鹤蟾片含药血清处理的LAC肿瘤细胞,细胞周期分析凋亡(AP)比例为5.6%,TUNEL法检测凋亡阳性率为12.3%,TUNEL分析结果明显高于DNA细胞周期分析结果。